Разработка эффективных условий биосинтеза, выделения и очистки тирозин-фенол-лиазы из бактерий Citrobacter freundii - К. Г. Дюкова (ՀՀ ԳԱԱ հրատ.)
В работе приведены результаты исследований по разработке эффективной питательной среды для выращивания бактерии Citrobaсter freundii 62, состоящей из доступных и дешевых компонентов. Предлагаемая нами синтетическая среда с добавлением L-аспарагиновой кислоты обеспечивает быстрый рост культуры с высокой удельной тирозин-феноллиазной (ТФЛ) активностью, которая на порядок превышает аналогичный показатель для ТФЛ C. freundii, известный из литературы. Предложен эффективный метод очистки ТФЛ из клеток C. freundii, позволяющий получить фермент с высоким выходом и с применением минимального числа стадий очистки. В результате описанного нами метода очистки значение удельной активности ферментного препарата увеличивается в 6,1 раз, а общий выход активности составляет 40,2 %. Полученный очищенный ферментный препарат проявляет максимальную активность при температуре 35о и рН 8,5. Показано, что при хранении в глицерине в при- сутствии меркaптоэтанола период полуинактивации фермента увеличивается и составляет 15 сут. Աշխատանքում մշակվել է Citrobaсter freundii 62 շտամի աճեցման սննդամիջավայր, որը կազմված է մատչելի և էժան բաղադրիչներից: Մեր կողմից առաջարկվող L-ասպասրագինաթթվի հավելմամբ սինթետիկ սննդամիջավայրը ապահովում է կուլտուրայի արագ աճ և թիրոզին-ֆենոլ-լիազի (ԹՖԼ) բարձր ակտիվություն: Վերջինս մեկ կարգով գերազանցում է C. freundii -ի ԹՖԼ-ի գրականությունից հայտնի համանման ցուցանիշը: Առաջարկված է C. freundii բջիջներից ԹՖԼ-ի մաքրման արդյունավետ եղանակ: Այն հնարավորություն է տալիս մաքրման նվազագույն փուլերի կիրառմամբ ստանալ բարձրաստիճան մաքրությամբ և ակտիվությամբ ֆերմեն- տային պատրաստուկ: Մեր կողմից նկարագրված մաքրման մեթոդի արդյունքում ֆերմենտային պրեպարատի տեսակարար ակտիվությունը աճում է ավելի քան 6,1 անգամ, իսկ ակտիվության ընդհանուր ելքը կազմում է 40,2 %: Ստացված մաքուր ֆերմենտային պրեպարատը մաքսիմալ ակտիվություն է ցուցաբերում 350 ջերմաստիճանում և 8,5 рН-ում: Ցույց է տրված, որ մերկապտոէթանոլի ներկայությամբ գլիցերինում պահելիս ֆերմենտի կիսաինակտիվացման ժամանակը բազմակիորեն աճում է և կազմում է 15 օր: In this study the fermentation medium for growing Citrobaсter freundii 62 strain, consisting of cheap and available components, was developed. Suggested synthetic growth medium with addition of L-aspartic acid provide the rapid culture growth with high tyrosine-phenol-lyase (TPL) activity, which in order exceeds the analogous index for TPL of C. freundii known from literature. An efficient method for TPL purification from C. freundii cells has been offered, which allows to obtain the purified enzyme in high yield using minimum of purification steps. As a result of described purification procedure the specific activity of preparation arises in 6.1 times, and the yield of activity makes up 40.2 %. The obtained purified enzyme preparation exhibits maximum activity at temperature 35 оC and pH 8.5. It was shown, that in case of keeping in glycerol in presence of mercaptoethanol the enzyme half lifetime increases many times making up 15 days.
Keywords: Biology; Biochemistry